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如何應用分子檢驗協助臨床診斷
 
 

台灣動物科技研究所 分子診斷實驗室 楊程堯

近年來,寵物在人類生活中扮演的角色越來越重要,甚至已被視為是家庭的一份子,因此現在許多人已經將所謂「寵物」改稱為「伴侶動物」。因此一旦犬貓罹患疾病時,畜主也希望能夠得到與人類相當的照護;同時,臨床獸醫師也因應社會與科技發展,自我要求也越來越高,因此希望面對類似症狀的疾病時,除了對症治療之外,更希望能夠確定病原種類,期能因應特定病原進行最適化治療,在此時空背景之下,利用分子檢驗技術協助臨床診斷日益受到重視,並開始逐漸普及。

分子檢驗技術植基於近年快速發展的分子生物學,許多生命科學的問題可藉由基因體的了解得到解答,相關的設備儀器快速發展,價格也可壓低到一般實驗室可接受的範圍。所以近十年來有許多分子檢測法被開發出來,並應用到臨床檢體的檢驗中。由於分子檢測技術具有快速、敏感度高的特性,因此臨床診斷發現可疑病例時,臨床獸醫師除了可藉由過去經驗判斷之外,現在可經由分子檢測技術的協助,獲得更精確的臨床診斷。

目前最常使用於臨床微生物的分子檢測技術為聚合?鏈反應技術,簡稱PCR,其原理為利用臨床微生物基因體中特異性的核酸序列,設計一對「引子對」,藉由引子對不斷粘合、延展、分開的重複步驟,將特異性的核酸片段所「夾住」的核酸片段增幅百萬倍, 經過洋菜膠電泳後可以看到反應帶。因此可將不可見的微量微生物,在短時間內擴增為可見的反應條帶,藉此了解是否該動物是否感染特定微生物。

分子檢測技術雖然方便快速,但並非萬靈丹,也不是微生物診斷的黃金標準。使用分子檢測技術協助臨床診療的主要作用藉此在短時間內知道檢體中是否含有預期中的病原體,因此可將分子檢測結果當作臨床診斷,但不可作為最終診斷。例如A獸醫師檢診一個主訴貧血的病例,發現可能是血液寄生蟲造成,但血液抹片中並無法判定是何種血液寄生蟲,因此利用分子檢驗法檢查犬焦蟲、犬艾利希體與血巴東體,結果發現犬艾利希體出現明顯陽性反應,因此可推論該犬因犬艾利希體感染造成貧血。如果投藥處理犬艾利希體後病情好轉,且後續追蹤確定血液中的原蟲核酸量減少,方可確定是犬艾利希體症。但是本案例因A獸醫師懷疑患犬可能受到犬焦蟲、犬艾利希體、血巴東體感染,因此選擇檢測此三種病原體,但因未對其他病原檢測,所以一旦投藥無效,可能還有其他未考慮到的因素造成貧血,因此還需要其他臨床檢測或檢驗輔助診斷,才能確實解決病因。因此,分子檢驗主要提供作為臨床醫師進行類症鑑別時的強大工具,可是並無法提供檢驗項目以外的資訊,所以臨床醫師如果發現所選的檢測項目竟然全部呈現陰性反應時,應考慮其他可能致病因子。

此外,臨床醫師有時發現,利用市售檢測試劑檢測與分子檢驗結果不符。例如B獸醫師利用市售犬心絲蟲、犬艾利希體與萊姆病三合一檢測套組檢測病犬,發現犬心絲蟲呈現陽性反應,可是同一個檢體送到檢驗單位進行犬心絲蟲進行分子檢驗時,竟然呈現陰性反應,如此互相悖離的結果實在令人困擾。此時須注意市售檢測試劑的檢驗內容,該試劑檢測的是犬心絲蟲「抗體」以及犬艾利希體與萊姆病病原體,應用該試劑檢驗時,犬心絲蟲呈現陽性反應表示該病犬過去曾感染過犬心絲蟲,犬艾利希體與萊姆病呈現陽性反應則代表病犬體內正存在病原體,兩者意義不同。因此檢測到犬心絲蟲呈現陽性反應代表犬心絲蟲「抗體」呈現陽性反應,當時體內未必正好存在犬心絲蟲蟲體,但分子檢驗檢測的是犬心絲蟲蟲體,因此兩者結果相反是可以理解的。由於市售檢測試劑琳瑯滿目,臨床獸醫師在使用時需注意該試劑檢測內容,以免徒增困擾。

但是提供分子檢驗的廠商不只一個,有時發現同一個檢體,在兩家檢測得到不同的結果,一家檢測為陽性,一家檢測為陰性,此結果也常困擾臨床獸醫師。發生這種狀況大致有下列幾點原因:一者為兩個實驗室使用的引子對不同,因此可檢測的微生物種類也會有些微的不同,如果剛好感染的病原體基因是屬於比較特異的品系,可能發生不同結果;二者比較常見的原因是兩家的檢測敏感度不同,例如甲公司的敏感度可檢測到1000個病原體,乙公司可檢測到100個病原體,如果送檢的病原體含量介於兩者之間(例如300個),即可能出現甲公司檢測得到陰性結果而乙公司檢測得到陽性結果的現象。

臨床診斷是一門結合經驗與科學的藝術,臨床獸醫師在日常檢診的過程中,難免遇到疑難雜症,有時必須藉助科學的進展協助診斷,不但提升自己的診斷經驗值與精確度,也可提升獸醫師在畜主心目中的專業地位。分子檢驗技術在臨床診斷上,未來一定會扮演非常重要的地位,現在人醫體系在臨床診斷上已經有相當高的使用頻率,未來伴侶動物醫學也會因應畜主對於醫療的品質要求,逐漸提高使用率,臨床獸醫師可藉由優秀的檢驗實驗室,獲得優質的服務,除提高診斷確診率,也可增強獸醫師在畜主心目中的專業印象, 有助於醫療業務之品質與推展。

 
 
 
 
 
 
   
 

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